佰利萊生物試劑盒常用方法及原理

佰利萊生物主營產(chǎn)品：
1.Elisa試劑盒系列：
ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。
ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到眾多科研實(shí)驗(yàn)工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。
Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
可檢測種屬 
（人，小鼠，大鼠，植物，魚，蝦，蟹，牛，羊，狗，貓，微生物，細(xì)胞，土壤等動植物）
可以檢測樣為
（血清，血漿，唾液，尿液，組織，細(xì)胞上清，裂解液等）
產(chǎn)品檢測目的：
樣本水平表達(dá)（定量檢測，定性檢測，酶活性檢測）
規(guī)格：96T 可以檢測89個(gè)樣  48T可以檢測41個(gè)樣
備注：6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)一個(gè)空白對照
有效期：6個(gè)月 保存2-8°C
佰利萊生物elisa試劑盒的優(yōu)點(diǎn)：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五、最大限度的節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
佰利萊生物常用方法及原理如下：
1. 夾心法：
夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:
a. 將具有專一性的抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
c. 洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)
d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)
e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法：

間接法常用于檢測抗體，一般的操作步驟為：
a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。
b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
c. 洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測的一次抗體鍵結(jié)。
d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。
原理：利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體。
3. 競爭法：
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：
a. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
b. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。
d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。
e. 當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí)，一般會考慮使用競爭法ELISA。
原理：將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。