小鼠磷酸試劑盒的測定步驟及使用注意事項如下

更新時間：2026-01-28

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　　小鼠磷酸試劑盒是一種專用于定量檢測小鼠生物樣本（如血清、血漿、組織勻漿液或細胞裂解液）中無機磷酸鹽（Pi）含量的生化檢測試劑盒，廣泛應用于代謝研究、腎功能評估、骨代謝調控、能量代謝（如ATP水解）及信號轉導通路（如蛋白磷酸化/去磷酸化）等相關科研領域。該試劑盒基于經典的鉬藍比色法或酶促反應原理，具有操作簡便、靈敏度高、重復性好等優點，適用于高校、科研院所及生物醫藥企業的實驗室使用。

　　小鼠磷酸試劑盒的測定步驟及使用注意事項如下：

　　一、測定步驟

　　1.準備與配液

　　從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。

　　用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

　　2.加樣

　　取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置。

　　在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。

　　3.溫育與洗板

　　37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

　　棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

　　4.加酶標工作液與再次溫育洗板

　　每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。

　　重復上述溫育與洗板步驟。

　　5.顯色與終止

　　每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，37℃避光顯色15min。

　　取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。

　　6.測定與計算

　　以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。

　　根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。

　　二、使用注意事項

　　1.試劑保存與使用

　　試劑盒應保存在28℃，避免直接接觸終止液和底物A、B。

　　不同批號的試劑盒組份避免混用（洗滌液和反應終止液除外）。

　　濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，但加熱溫度不要超過50℃。

　　2.加樣與溫育

　　各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

　　嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫2025℃。

　　3.洗板與顯色

　　洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

　　底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

　　4.其他注意事項

　　消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

小鼠磷酸試劑盒

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